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近日，湖南省兒童醫(yī)院聯(lián)合杰毅生物共同開展了關(guān)于新生兒感染研究，并應(yīng)用 Q-mNGS 針對傳統(tǒng)病原學(xué)陰性的新生兒感染患者進行病原檢測和監(jiān)控治療，研究成果發(fā)表在《Frontiers in Microbiology》（IF 5.64）。湖南省兒童醫(yī)院新生兒科張榕副教授為本文第一作者，杰毅生物劉超博士和湖南省兒童醫(yī)院彭小明主任為通訊作者。

01 研究背景

感染性疾病是導(dǎo)致新生兒死亡的重要原因。2019 年全球報告每 100 名活產(chǎn)嬰兒中有 17 人死亡，每天有 6,700 名新生兒死亡，約 48% 的 7 天以上新生兒死亡可歸因于微生物感染。本研究匯報了 10 例傳統(tǒng)方法未能闡明病因的嚴重感染新生兒患者，對這些患者進行定量宏基因組測序（Q-mNGS，實現(xiàn)人源和病原的相對定量），成功發(fā)現(xiàn)病原體并根據(jù) Q-mNGS 結(jié)果輔助監(jiān)控療效。

02 主要研究結(jié)果

10 名參與者的年齡從 2 天到 52 天不等，其中 4 名參與者 (40%) 是女性。疾病類型包括肺炎、敗血癥和腦膜炎，入組患者的臨床特征列于表 1。研究對 10 名患兒同時進行傳統(tǒng)微生物檢測（培養(yǎng)、抗原檢測和 PCR）和 Q-mNGS 檢測，結(jié)果顯示，傳統(tǒng)病原學(xué)檢測均為陰性，而 Q-mNGS 則檢測到結(jié)核分枝桿菌、嗜肺軍團菌、蠟樣芽孢桿菌等病原體。后續(xù)臨床根據(jù) Q-mNGS 檢測結(jié)果進行抗生素調(diào)整及療效監(jiān)控，有 8 名患兒在治療后恢復(fù)健康，10 名患者 Q-mNGS 檢測結(jié)果見表 2。

表 1 入組患者的臨床特征

表 2 10 名患者的 mNGS 檢測結(jié)果

本研究中，當所有常規(guī)方法都未能發(fā)現(xiàn)新生兒感染的 “罪魁禍首” 時，Q-mNGS 提供了準確的病原學(xué)診斷依據(jù)，并指導(dǎo)針對性使用抗生素治療。因此有望降低新生兒感染的疾病管理總體成本和患者負擔(dān)。

案例一：結(jié)核分枝桿菌

19 日齡男性患兒 1 出現(xiàn)發(fā)燒和呼吸急促及呼吸衰竭。外周血、痰、腦脊液的結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)為陰性，炎癥指標 CRP 為 153.04 mg/dL，降鈣素原 (PCT) 為 16.44 ng/ml，入院 2 天后外周血 Q-mNGS 檢出結(jié)核分枝桿菌（序列數(shù) 59 條，相對豐度 83.1％，病原指數(shù)（Q 指數(shù)）10723.30，排位 86.03%），TAT 僅為 13 小時。隨后血液 T.SPOT 試驗和痰標本 Xpert MTB/RIF 試驗陽性，患兒及母親也呈現(xiàn)出結(jié)核感染影像學(xué)特征，基于此臨床診斷該患兒為先天性結(jié)核病，并進行針對性治療后患兒恢復(fù)正常。?

圖 1 患兒的胸部 CT 結(jié)果

圖 2 結(jié)核分支桿菌感染的診療過程

案例二 ：嗜肺軍團菌

4 日齡的女性患兒 2 出現(xiàn)發(fā)燒和咳嗽，并迅速惡化。炎癥指標 CRP 高于 320 mg/dL，PCT 為 1.07ng/mL，乳酸水平為 4.3mmol/L。痰、血液、腦脊液和 BALF 微生物培養(yǎng)均為陰性，入院 12 天后肺泡灌洗液和外周血進行?Q-mNGS 檢出嗜肺軍團菌（BALF 序列數(shù)為 24055 條，相對豐度 96.18%，Q 指數(shù) 22014.71，排位 91.05% 和外周血序列數(shù) 361 條，相對豐度 96.52%，Q 指數(shù) 13653.88，排位 71.54%）。肺泡灌洗液進行 16s 核糖體 RNA (rRNA) 測序及血嗜肺軍團菌 IgM 抗體檢測結(jié)果陽性?；诖?strong>臨床診斷該患兒為軍團菌肺炎，針對性采用紅霉素治療，并送檢外周血標本進行 Q-mNGS 連續(xù)檢測，監(jiān)控嗜肺軍團菌的載量，治療 33 天后未檢出嗜肺軍團菌，停止用藥并進行隨訪，患兒生長和神經(jīng)發(fā)育均正常。

圖 3 Q-mNGS 和 16s 核糖體 RNA(rRNA) 測序檢出嗜肺軍團菌

圖 4 嗜肺軍團菌感染的診療過程

案例三：蠟樣芽孢桿菌

15 日齡女性患兒 10，出現(xiàn)呼吸急促 15 天、發(fā)熱 3 天、抽搐 2 天。炎癥指標 CRP 為 168.1mg/dL，PCT 為 18.12ng/mL。腦脊液檢查顯示白細胞 9.65×109/L，葡萄糖 1.02mmol/L，蛋白質(zhì) 2.64g/L。痰、血液、腦脊液微生物培養(yǎng)均為陰性，腦脊液生化提示細菌性腦炎，送檢腦脊液進行 Q-mNGS 檢測，檢出蠟樣芽孢桿菌序列數(shù) 61 條，相對豐度 6.21%，Q 指數(shù) 9559.24，排位 94.4%。結(jié)合患兒的腦部影像學(xué)特征及 16rRNA 測序結(jié)果，臨床擬診蠟樣芽孢桿菌感染。送檢腦脊液標本進行 Q-mNGS 連續(xù)檢測，監(jiān)控蠟樣芽孢桿菌的載量，調(diào)整抗生素方案。3 個月隨訪患兒感染指標恢復(fù)正常，仍存在彌漫性腦軟化癥。

圖 5 蠟樣芽孢桿菌感染的診療過程

2022 新年伊始，杭州杰毅生物技術(shù)有限公司（以下簡稱 “杰毅生物”）與國內(nèi)領(lǐng)先的分子診斷技術(shù)企業(yè)蘇州思納福醫(yī)療科技有限公司（以下簡稱 “思納福醫(yī)療”）正式簽訂戰(zhàn)略合作協(xié)議，雙方將發(fā)揮感染病原分子檢測和數(shù)字 PCR 技術(shù)領(lǐng)域的優(yōu)勢，通過深入的科研合作，探索創(chuàng)新分子診斷技術(shù)在感染病原檢測領(lǐng)域的創(chuàng)新應(yīng)用。

感染性疾病一直是當今世界嚴重威脅人類健康和生命的重大疾病。目前，全球感染性疾病的發(fā)病率不斷上升，病原體呈現(xiàn)多樣化和復(fù)雜化的發(fā)展趨勢。及時、準確的醫(yī)療診斷是有效防治感染性疾病的重要手段。傳統(tǒng)病原微生物檢測技術(shù)存在不同局限，而分子生物學(xué)技術(shù)檢測憑借高靈敏度、準確性強、報告時間短等特點，逐漸成為病原微生物檢測的主流方法學(xué)。當前，感染性疾病的精準診療依舊面臨不少的挑戰(zhàn)，病原體的早期確定和準確鑒別對感染性疾病的預(yù)防及有效控制有非常重要的意義。

為了解決常見病原體的診斷難題，杰毅生物攜手思納福醫(yī)療通過緊密的技術(shù)科研合作，努力探索挖掘分子診斷技術(shù)在感染性疾病領(lǐng)域的創(chuàng)新應(yīng)用。作為感染性疾病新一代分子診斷技術(shù)的創(chuàng)新推動者，杰毅生物致力于將數(shù)據(jù)驅(qū)動與產(chǎn)品創(chuàng)新相結(jié)合，開拓先進的分子診斷技術(shù)在感染性疾病等人類健康領(lǐng)域的應(yīng)用。2020 年，公司首推 Q-mNGS 定量宏基因組檢測，將 mNGS 推進到 “定量” 時代；隨著技術(shù)的持續(xù)升級迭代，2021 年杰毅生物推出了 Q-mNGS 自動化解決方案，實現(xiàn)了 13 小時內(nèi)完成 mNGS 檢測全流程。

目前已與中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院、復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院、廣州呼吸健康研究院等國內(nèi)頂級臨床機構(gòu)建立了深入合作，共同開展臨床應(yīng)用與醫(yī)學(xué)轉(zhuǎn)化研究。

思納福醫(yī)療旨在通過技術(shù)革新，為行業(yè)提供快速、靈敏、精準、智能的分子診斷解決方案。2020 年，公司推出全球首款無需微流控芯片的一體化數(shù)字 PCR 檢測設(shè)備 DQ24。憑借操作便捷、結(jié)果準確、靈敏度高，成本可控等優(yōu)勢，2021 年客戶已達 100 多家，其中包括中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院、中國人民解放軍總醫(yī)院、國家計量院等權(quán)威機構(gòu)，并拿到 FDA、CE、NMPA 的臨床準入許可。

目前已有多款試劑進入注冊階段，有望實現(xiàn)數(shù)字 PCR 技術(shù)在各應(yīng)用場景的落地和普及。

隨著本次戰(zhàn)略合作的順利達成，杰毅生物與思納福醫(yī)療將在新的一年里開拓創(chuàng)新，并肩前行，共同拓展分子診斷新技術(shù)在病原感染病原檢測領(lǐng)域的應(yīng)用。通過更快速、更精準的分子診斷技術(shù)幫助臨床提高常見感染病原的檢出率，讓每位感染患者第一時間得到精準診療。

關(guān)于思納福醫(yī)療

思納福醫(yī)療專注于新一代分子診斷技術(shù)的研發(fā)和產(chǎn)業(yè)化，憑借其獨創(chuàng)的 “振動注射” 技術(shù)，推出了全球首款無需微流控芯片的一體化數(shù)字 PCR 檢測設(shè)備，徹底解決了數(shù)字 PCR 技術(shù)在臨床應(yīng)用中存在的成本過高，操作復(fù)雜的核心痛點。經(jīng)過多年積淀，思納福醫(yī)療逐步形成了以 “技術(shù)革新為前提，先進工藝為核心，全產(chǎn)業(yè)鏈整合為基礎(chǔ)，精細化管理為保障” 的四位一體發(fā)展策略。公司立足中國，面向世界，旨在通過不斷的技術(shù)革新，為行業(yè)提供快速、靈敏、精準、智能的分子診斷解決方案。

關(guān)于杰毅生物

杭州杰毅生物技術(shù)有限公司是一家專注于感染性疾病分子診斷的高新技術(shù)企業(yè)。秉承創(chuàng)新驅(qū)動發(fā)展的經(jīng)營理念，致力于將數(shù)據(jù)驅(qū)動與產(chǎn)品創(chuàng)新相結(jié)合，開拓先進的分子診斷技術(shù)在感染性疾病等人類健康領(lǐng)域的應(yīng)用，讓疾病診斷更簡單、更快速、更智能。公司聚焦感染疾病精準醫(yī)療領(lǐng)域，布局多項核心專利技術(shù)，已形成基因編輯（CRISPR/Cas）和高通量測序（NGS）兩大前沿技術(shù)平臺，搭建起了多層次，高品質(zhì)的產(chǎn)品線及服務(wù)體系，為臨床患者提供感染性疾病分子診斷的整體解決方案。

近日，國家藥品監(jiān)督管理局官網(wǎng)發(fā)布 YY/T 1836-2021（呼吸道病毒多重核酸檢測試劑盒）的行業(yè)標準，并于 2022 年 12 月 1 日開始實施的公告（2021 年第 144 號）。新的標準規(guī)定了呼吸道病毒多重核酸檢測試劑盒（以下簡稱試劑盒）的要求、試驗方法、標簽和使用說明書、包裝、運輸和貯存。本次 YY/T 1836-2021（呼吸道病毒多重核酸檢測試劑盒）標準由國家食品藥品監(jiān)督管理總局提出。?由全國醫(yī)用臨床檢驗實驗室和體外診斷系統(tǒng)標準化技術(shù)委員會 (SAC/TC 136) 歸口。
杰毅生物作為標準起草單位之一，參與了本次行業(yè)標準的制定。

呼吸道病毒多重核酸檢測試劑盒行業(yè)標準，將多重呼吸道病毒核酸檢測領(lǐng)域推向高潮，也意味著自 2019 年 11 月 17 日國家藥監(jiān)局公布呼吸道病毒多重核酸檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則后又一重磅性標準的確立，也為以后 IVD 企業(yè)呼吸道多重核酸檢測試劑注冊指明了方向。標準適用于呼吸道病毒多重核酸檢測試劑盒的質(zhì)量控制，試劑盒適用的樣本類型包括但不限于：鼻咽拭子、鼻拭子、咽拭子、肺泡灌洗液、痰液或其他呼吸道分泌物；適用的待檢測的呼吸道病毒包括但不限于：

甲型流感病毒（Influenza A，IFV A）

乙型流感病毒（Influenza B，IFV B）

呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV）

副流感病毒（Parainfluenza Virus，PIV）

人偏肺病毒（Human Metapneumovirus，hMPV）

腺病毒（Adenovirus，Adv）

呼吸道感染腸道病毒（腸道病毒/鼻病毒）（Enterovirus，EV/ Rhinovirus， RhV）

冠狀病毒（Coronavirus，CoV）

適用的檢測方法包括但不限于：

熒光 PCR 法

液相/固相芯片法

PCR 熔解曲線法

等溫擴增法

CR 毛細電泳片段分析法

第二代測序技術(shù)等

呼吸道多重核酸檢測試劑盒行業(yè)標準正文

1. 范圍本標準規(guī)定了呼吸道病毒多重核酸檢測試劑盒（以下簡稱 “試劑盒”）的要求、試驗方法、標簽和使用說明書、包裝、運輸和貯存。

本行標適用于呼吸道病毒多重核酸檢測試劑盒的質(zhì)量控制，試劑盒適用的樣本類型包括但不限于：鼻咽拭子、鼻拭子、咽拭子、肺泡灌洗液、痰液或其他呼吸道分泌物；

適用的待檢測的呼吸道病毒包括但不限于：甲型流感病毒（Influenza A，IFV A）、乙型流感病毒（Influenza B，IFV B）、呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV）、副流感病毒 (Parainfluenza Virus，PIV)、人偏肺病毒（Human Metapneumovirus，hMPV）、腺病毒（Adenovirus，Adv）、呼吸道感染腸道病毒（腸道病毒/鼻病毒）（Enterovirus，EV/ Rhinovirus， RhV）、冠狀病毒（Coronavirus，CoV）；

適用的檢測方法包括但不限于：熒光 PCR 法、液相/固相芯片法、PCR 熔解曲線法、等溫擴增法、PCR 毛細電泳片段分析法及第二代測序技術(shù)等。

2. 規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 191 包裝儲運圖示標志 GB/T 29791.1 體外診斷醫(yī)療器械 制造商提供的信息（標示）?第 1 部分：術(shù)語、定義和通用要求 GB/T 29791.2 體外診斷醫(yī)療器械 制造商提供的信息（標示）?第 2 部分：專業(yè)用體外診斷試劑

3. 要求

3.1 外觀外觀應(yīng)符合如下要求：

a) 試劑盒各組分應(yīng)齊全、完整，液體無滲漏；

b) 中文包裝標簽應(yīng)清晰，無磨損；

c）生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的其他外觀要求。

3.2 核酸提取功能核酸提取功能應(yīng)符合如下要求：

a）包含核酸提取組份的試劑盒，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)對核酸提取做適當要求，并對核酸提取功能進行驗證。

b）樣本需要提取，但不含有核酸提取組份的試劑盒，由生產(chǎn)企業(yè)說明或指定提取試劑盒，并提供驗證或確認資料。

c）樣本無需提取，直接進行擴增的試劑盒，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)能提供充分證據(jù)，以證明其抗干擾性。

3.3 陽性參考品符合率用試劑盒檢測范圍內(nèi)的國家參考品或經(jīng)標化的企業(yè)陽性參考品進行檢測，結(jié)果應(yīng)均為相應(yīng)病毒陽性，并與預(yù)期型別一致（如適用）。經(jīng)標化的企業(yè)陽性參考品應(yīng)符合以下要求：

a）陽性參考品應(yīng)覆蓋試劑盒聲稱可檢出的主要呼吸道病毒型別和亞型。企業(yè)參考品應(yīng)包括不少于試劑盒檢測范圍內(nèi)國家參考品的病毒型別和亞型；

b）陽性參考品應(yīng)盡量覆蓋弱陽、中陽及強陽性等不同濃度水平，弱陽性應(yīng)使用 1.5~4 倍檢出限濃度；

c）可根據(jù)試劑盒特點將不同病原體混合后作為陽性參考品使用。

3.4 陰性參考品符合率用國家參考品或經(jīng)標化的企業(yè)陰性參考品進行檢測，不在試劑盒檢測范圍內(nèi)的病原體應(yīng)均為陰性。經(jīng)標化的企業(yè)陰性參考品應(yīng)符合以下要求：

a）陰性參考品應(yīng)納入不在試劑盒檢測范圍內(nèi)、易引發(fā)相似癥狀、或感染部位相同的其他病原體樣本。企業(yè)參考品應(yīng)包括不少于國家參考品的病原體類型；

b）建議在病毒和細菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進行驗證，通常，細菌感染的水平為 1X106CFU（菌落形成單位）/mL 或更高，病毒為 1X105PFU（空斑形成單位）/mL 或更高；

c）可根據(jù)試劑盒特點將不同病原體混合后作為陰性參考品使用。

3.5 檢出限用國家檢出限參考品或經(jīng)標化的企業(yè)檢出限參考品進行檢測，結(jié)果應(yīng)符合國家參考品或企業(yè)聲稱的相應(yīng)要求。經(jīng)標化的企業(yè)檢出限參考品應(yīng)符合以下要求：

a）檢出限參考品應(yīng)包含試劑盒可檢出的呼吸道病毒主要型別及亞型；

b）病毒濃度單位可采用 TCID50（半數(shù)組織細胞感染量）、PFU 或 copies/mL；

c）應(yīng)根據(jù)試劑盒特點，必要時設(shè)置混合檢出限參考品，對臨床上常見的呼吸道病毒混合感染情況下（如甲型流感病毒與呼吸道合胞病毒）高濃度分析物對低濃度分析物檢測的影響進行評估。

建議使用同一反應(yīng)體系內(nèi)病毒、常見重癥感染病毒及常見混合感染病毒，將一種最低檢測限濃度的分析物和一種高濃度分析物混合作為檢出限參考品。

3.6 精密度用國家參考品或經(jīng)企業(yè)標化的精密度參考品進行檢測，結(jié)果應(yīng)符合國家參考品或企業(yè)聲稱的相應(yīng)要 3 求。經(jīng)標化的企業(yè)精密度參考品應(yīng)符合以下要求：

a）可不包含所有涉及的呼吸道病毒型別和亞型，但應(yīng)選擇多個臨床較常見的型別；

b）應(yīng)至少設(shè)置弱陽性、中陽或強陽性兩個水平，弱陽應(yīng)使用 1.5~4 倍檢出限濃度；

c）可將不同病原體混合后作為精密度參考品使用。

3.7?穩(wěn)定性（討論是否保留）可對效期穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性進行驗證：

a) 效期穩(wěn)定性：企業(yè)應(yīng)規(guī)定試劑盒的有效期。取到效期后一定時間內(nèi)的試劑盒，檢測外觀、陽性參考品符合率、陰性參考品符合率、檢出限和精密度，結(jié)果應(yīng)符合 3.1、3.3-3.6 項相應(yīng)要求；

b) 熱穩(wěn)定性：在企業(yè)規(guī)定的加熱條件下處理試劑盒，檢測外觀、陽性參考品符合率、陰性參考品符合率、檢出限和精密度，結(jié)果應(yīng)符合 3.1、3.3-3.6 項相應(yīng)要求。

注 1：一般地，效期為 1 年時選擇到效期后不超過 1 個月的產(chǎn)品，效期為半年時選擇到效期后不超過半個月的產(chǎn)品，以此類推。但如超過規(guī)定時間，產(chǎn)品符合要求時也可接受；

注 2：熱穩(wěn)定性不能用于推導(dǎo)產(chǎn)品有效期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導(dǎo)公式；

注 3：根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇 a)、b) 方法的任意一種或兩種，但所選用方法宜能驗證產(chǎn)品的穩(wěn)定性，以保證在效期內(nèi)產(chǎn)品性能符合標準要求。

4 . 試驗方法

4.1 外觀在自然光下以正常視力或矯正視力目視檢查，結(jié)果應(yīng)符合 3.1 的要求。

4.2 核酸提取效率功能適用時，按照生產(chǎn)企業(yè)提供的方法進行試驗，檢測結(jié)果應(yīng)符合 3.2 的要求。

4.3 陽性參考品符合率用國家參考品或經(jīng)標化的企業(yè)陽性參考品進行檢測，按產(chǎn)品說明書進行操作，結(jié)果應(yīng)符合 3.3 的要求。

4.4 陰性參考品符合率用國家參考品或經(jīng)標化的企業(yè)陰性參考品進行檢測，按產(chǎn)品說明書進行操作，結(jié)果應(yīng)符合 3.4 的要求。

4.5 檢出限用國家參考品或經(jīng)標化的企業(yè)檢出限參考品進行檢測，按產(chǎn)品說明書進行操作，結(jié)果應(yīng)符合 3.5 的 4 要求。

4.6 精密度

4.7?穩(wěn)定性可選用以下一種或兩種方法進行驗證：a) 效期穩(wěn)定性：取到效期后一定時間內(nèi)的試劑盒，按產(chǎn)品說明書進行操作，結(jié)果應(yīng)符合 3.7a) 的要求。b) 熱穩(wěn)定性：將試劑盒在一定溫度條件下放置一定時間，按產(chǎn)品說明書進行操作，結(jié)果應(yīng)符合 3.7 b) 的規(guī)定。

5. 標簽和說明書應(yīng)符合 GB/T 29791.2 的規(guī)定。

6 . 包裝、運輸、貯存 6.1 包裝包裝儲運圖示標志應(yīng)符合 GB/T 191 的規(guī)定。包裝容器應(yīng)保證密封性良好，完整，無泄露，無破損。6.2 運輸試劑盒應(yīng)按生產(chǎn)企業(yè)的要求運輸。在運輸過程中，應(yīng)防潮，防止重物堆壓，避免陽光直射和雨雪浸淋，防止與酸堿物質(zhì)接觸，防止內(nèi)外包裝破損。6.3 貯存試劑盒應(yīng)在生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定條件下保存。

近日，杰毅生物 Q-mNGS 助力蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院成功診斷一例下頜骨彌漫性大 B 細胞淋巴瘤病例，表明 Q-mNGS 不僅有助于快速診斷感染病原，而且有助于排除感染以及診斷腫瘤。病例報道發(fā)表在《Frontiers in Medicine》（IF 5.091）。杰毅生物劉超博士和蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院李潔主任為本病例報道的共同通訊作者。

淋巴瘤是起源于淋巴造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，是頭頸部第二常見的惡性腫瘤?；羝娼鹆馨土觯℉L）和非霍奇金淋巴瘤（NHL）是兩大類主要的淋巴瘤，后者發(fā)病率遠高于前者。NHL 主要是一種淋巴結(jié)疾病，但也可累及淋巴系統(tǒng)以外的器官，如胃、皮膚、肺、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和口腔。原發(fā)性骨 NHL 累及下頜骨較為罕見，僅占結(jié)外淋巴瘤的 0.6%，且多為彌漫性大 B 細胞淋巴瘤（DLBCL），發(fā)展迅速、預(yù)后差，患者臨床表現(xiàn)為牙痛、腫脹、牙齒松動和病理性骨折，早期常被誤診為牙髓病，延誤診療。

宏基因組測序（mNGS）可無偏倚的對臨床標本中的人類和微生物核酸進行測序，具有無需假設(shè)、無需培養(yǎng)的技術(shù)，已被廣泛用于感染性疾病的診療，陽性率顯著高于傳統(tǒng)培養(yǎng)（61.0 vs. 19.5%）。同時，mNGS 獲得的人基因組序列可用于檢測染色體拷貝數(shù)變異，有助于診斷隱源性腫瘤。

本文報告一例 52 歲女性患者的下頜骨 DLBCL，并伴有復(fù)發(fā)性發(fā)熱和牙痛，根據(jù) Q-mNGS 結(jié)果排除了微生物感染。另外，通過對人源核酸序列進行分析，發(fā)現(xiàn)患者的染色體拷貝數(shù)異常，因此懷疑患有癌癥。

病例報告如下：

病情介紹

患者女性，52 歲，反復(fù)發(fā)熱 1 個多月，最高體溫 38.8℃，伴有畏寒。患者感到左下頜骨麻木，左牙齒輕微疼痛。血常規(guī)正常，C 反應(yīng)蛋白（CRP）7.33 mg/L，紅細胞沉降率（ESR）42 mm/h，類風(fēng)濕因子 5.7 IU/mL，抗 O 89 IU/ml，抗核抗體、甲功、EBV、CMV-DNA、腫瘤標志物均陰性。頭顱（包括下頜骨）、胸部、腹部 CT 未見活動性病變，心超正常?；颊呷朐呵安?PET-CT，顯示下頜骨左支牙槽葡糖糖代謝增高（SUV max=5.87）(圖 1)。雙肺多發(fā)小結(jié)節(jié)，雙肺下葉滲出性改變，脾腫大，考慮感染可能。

圖 1. 患者入院前 PET-CT 結(jié)果

經(jīng)抗菌、抗病毒治療 4 周后，患者仍有反復(fù)發(fā)熱，并伴有出汗。血常規(guī)示，紅細胞計數(shù) 3.10×10¹²/L，血紅蛋白 86 g/L，中性粒細胞 1.77×10⁹/L，淋巴細胞 0.71×10⁹/L, CRP 16.6 mg/L；尿常規(guī)示，尿潛血弱陽性；大便常規(guī)、輸血常規(guī)、血培養(yǎng)、尿培養(yǎng)、體液免疫、肥達試驗、抗核抗體譜、抗中性粒細胞胞漿抗體、G 試驗、EBV-DNA 均陰性；GM 試驗（0.59 μg/L）和T spot.TB 陽性；生化檢查示，肝腎功能正常，白蛋白 26.7 g/L, ESR 46 mm/h；凝血功能檢查示，d -二聚體 0.73 mg/L，凝血酶原時間 15.30 s；腫瘤生物標志物檢測示，鐵蛋白 363.36 ng/mL；血清免疫固定電泳陰性。超聲檢查示，淺表淋巴結(jié)、食管、心臟未見明顯異常。腹部超聲示脾下極有實質(zhì)回聲，應(yīng)考慮副脾。

初始治療

首先給予替卡西林和莫西沙星抗感染，治療后 9 天，患者仍有發(fā)熱，熱峰 38.6℃。血常規(guī)及生化檢查未見明顯改變。血清蛋白電泳和游離輕鏈定量均陰性。故將抗生素升級為利奈唑胺聯(lián)合舒普深和替硝唑。3 天后，患者癥狀仍無好轉(zhuǎn)，停用抗生素。

Q-mNGS 檢測

在抗生素治療效果不佳的情況下，采集患者外周血進行了 Q-mNGS 檢測，未檢出病原體（低人源真陰性），提示可能為非感染性疾病。對 Q-mNGS 獲得的人源數(shù)據(jù)進行染色體拷貝數(shù)（CNV）分析，結(jié)果顯示 1、5、6、11 和 14 號染色體有明顯的改變（重復(fù)和缺失，圖 2），提示存在腫瘤細胞?；颊呖谡衬な米?CNV 分析未發(fā)現(xiàn)異常，表明外周血 Q-mNGS 檢測到的 CNV 并非由遺傳疾病引起。

圖 2. 患者外周血、口粘膜拭子、活檢組織 Q-mNGS CNV 分析結(jié)果

跟蹤及結(jié)果

患者進行骨髓活檢，形態(tài)學(xué)檢查顯示紅系細胞百分比略高，鐵染色顯示鐵利用障礙。骨髓中可見少量噬血細胞。左下頜骨穿刺活檢并進行免疫組化檢測（圖 3），結(jié)果顯示瘤細胞 CD20(+)，CD79a(+)，Bc1-2(+)，CD5(少量散在＋），C-myc(少量＋），Ki-67(+，90%)，CD10(-)，Kappa(-)，Lambda(-)，CD38(-)，CD138(-)，CD3(-)，Desmin(-)， MyoD1(-)， Myogenin(-)，CD99(-)，CK(-)，Syn(-)，EMA(-)，CyclinD1(-)，Bc1-6(-)，MUM1(-)，CD30(-)，SOX11(-)，提示為惡性 B 細胞淋巴瘤（彌漫性大 B 細胞型）?；颊弑辉\斷為 DLBCL，轉(zhuǎn)入血液科進行免疫化療 [利妥昔單抗 600 mg d1，環(huán)磷酰胺 1.1 g d2，阿霉素 40 mg d2，長春地辛 4 mg d2，潑尼松 15 mg d1-5 (R-CHOP)]。R-CHOP 方案治療 5 個周期，患者再次進行全身 PET-CT 檢測，結(jié)果顯示左側(cè)下頜骨糖代謝下降（圖 4）。隨后進行輔助放療 15 次后，患者出院。在最近一次隨訪中，患者無發(fā)熱，無咳嗽，無腹痛，飲食正常，睡眠正常。

圖 3. 左下頜骨活檢及免疫組化結(jié)果

圖 4. 患者治療后 PET-CT 檢測結(jié)果

討論

不明原因發(fā)熱可歸因于多種因素，包括感染（40%）、腫瘤疾病（20%）、膠原血管?。?5%）等。一項回顧性研究發(fā)現(xiàn)，肺結(jié)核是最常見的感染性發(fā)熱原因，淋巴瘤是最常見的腫瘤性發(fā)熱原因。原發(fā)性骨 NHL 累及下頜骨，常表現(xiàn)為腫脹、疼痛、感覺異常、牙齒松動、病理骨折。患者通常在口腔科接受治療，經(jīng)常被誤診為口腔疾病。本病例患者血象和血液生化基本正常，CRP 和 ESR 輕微升高，提示炎癥反應(yīng)。除 T spot.TB 外，其他常規(guī)病原學(xué)檢查均陰性。但胸部 CT 未見肺部結(jié)核感染癥狀。GM 試驗首次呈陽性，重復(fù)后呈陰性。患者接受了根管治療和抗感染治療，但癥狀改善甚微。Q-mNGS 檢測結(jié)果為低人源真陰性，排除感染。PET-CT 顯示下頜骨左側(cè)糖代謝增高，血清鐵蛋白和腫瘤特異性生長因子升高。但在 Q-mNGS 檢測前，臨床并未懷疑腫瘤，因為膿腫、炎癥和齲齒等也會導(dǎo)致糖代謝增加，且腫瘤標志物的特異性較低。

Q-mNGS 通過對標本中的核酸（人源核酸和病原體核酸）進行檢測，分析微生物數(shù)據(jù)以用于感染性疾病的診斷。但臨床標本中的大多數(shù)核酸來源于宿主人類，Q-mNGS 通過分析標本中的人基因組數(shù)據(jù)，可獲得宿主拷貝數(shù)變異（DNA copy number variation, CNV）信息。CNV 是參與多種類型癌癥發(fā)生發(fā)展的遺傳變異的重要組成部分。通過測序檢測發(fā)現(xiàn)的染色體拷貝數(shù)變異最近被用于結(jié)腸直腸癌、乳腺癌和血液病惡性腫瘤的早期診斷。因此，Q-mNGS 具有同時診斷微生物感染和腫瘤的潛力。

腫瘤診斷的金標準是活檢和病理染色，需要借助侵入性手術(shù)，通常需要 3~7 天，且不主要考慮腫瘤時，可能并不選擇進行活檢。Q-mNGS 可檢測多種臨床標本，報告周期也較短（TAT 13 小時）。Q-mNGS 通過檢測 CNV，可促進臨床對腫瘤的關(guān)注，有助于對腫瘤的早期診斷。結(jié)合病原檢測和 CNV 分析，Q-mNGS 可提供多層次的診斷線索，有助于優(yōu)化腫瘤診斷的敏感性，對疑似感染的患者鑒別診斷具有重要意義。